Una monta corrisponde ad una dose? Una paillette è una dose? Quante paillette ci sono in una dose? Quanti spermatozoi sono contenuti in una dose? Queste sono domande che spesso sentiamo fare dai nostri clienti quando acquistano o usano del seme congelato. C’è una tale variabilità nel formato delle dosi vendute in tutto il mondo che talvolta si può generare della confusione. Per assicurarvi di avere le maggiori probabilità di successo quando inseminate la vostra cavalla è importante capire tutti gli elementi che contribuiscono a creare una dose adeguata di seme congelato. Qui troverete un sommario di tutte le domande più frequenti inerenti a che cosa costituisce una dose di seme congelato.
Che cosa è una dose di seme congelato?
Una dose di seme congelato è una quantità “x” di paillette usate per una inseminazione. Le paillette contengono una specifica concentrazione e volume di seme tali che quando vengono scongelate ed unite, la “dose” di seme costituisce una dose inseminante per la cavalla. La “dose” di seme deve contenere una quantità sufficiente di spermatozoi vivi per poter assicurare una ragionevole chance di ottenere una gravidanza in una fattrice sana dal punto di vista riproduttivo, gestita in modo appropriato.
Quanti spermatozoi ci dovrebbero essere in una dose?
Attualmente non esistono standard universalmente accettati per la produzione di seme di qualità da parte dei centri di Inseminazione Artificiale, vedete anche il nostro blog article Should the US Adopt Stricter Controls On Cooled and Frozen Semen Production Facilities. Comunque, è generalmente accettato che una dose di seme congelato dovrebbe contenere un minimo di 200 milioni di spermatozoi progressivamente motili. La World Breeding Federation of Sport Horses (WBFSH), una organizzazione europea, diversi anni fa ha pubblicato delle linee guida per la produzione di seme e per gli standard di qualità per le stazioni di monta dei suoi affiliati; i dettagli di queste linee guida si possono trovare qua.
Anche noi di Select Breeders Services raccomandiamo che il seme congelato abbia una motilità progressiva post scongelamento come minimo del 30% per essere utilizzato in un programma commerciale di distribuzione.
In ogni caso, bisogna ricordare che benché la motilità sia un indicatore della buona condizione cellulare, la fertilizzazione è un processo complesso che coinvolge numerosi e differenti attributi sia dello spermatozoo che della cellula uovo. Quindi la vera fertilità di qualsiasi seme congelato può essere determinata solamente con la fecondazione tecnicamente ottimale di cavalle sane dal punto di vista riproduttivo
Vedi anche le FAQs:
La motilità post scongelamento è correlata alla fertilità?
Si può ottenere una gravidanza con del seme con motilità progressiva <30%?
Sul nostro blog il mese prossimo discuteremo su “Cos’è la motilità progressiva?”
Come si calcola il numero di Spermatozoi Progressivamente Motili in una Dose?
Per calcolare il numero di spermatozoi progressivamente motili in una dose si devono avere le seguenti informazioni:
• Il numero totale di spermatozoi nella dose
• La motilità progressiva post scongelamento per quel lotto di produzione (cioè la data di raccolta) di seme congelato
Il numero totale di spermatozoi per dose inseminante può essere calcolato moltiplicando la concentrazione spermatica per il volume di seme della dose inseminante. Facciamo un esempio:
Una dose inseminante di 8 x 0,5ml (8 paillette da 0,5ml) consiste in un totale di 800 milioni di spermatozoi e la motilità progressiva post scongelamento è del 35%.
Il volume della dose è 4ml (8 x 0,5ml)
La concentrazione spermatica è 200 milioni/ml. Lo sappiamo perché il numero totale di spermatozoi nella dose è 800 milioni, quindi 800 diviso per il volume di 4ml = 200 milioni di spermatozoi/ml.
Il numero di spermatozoi progressivamente motili per dose (PMS) è calcolato moltiplicando il numero totale di spermatozoi per la motilità progressiva.
In questo esempio abbiamo 800 milioni di cellule totali, ma solo il 35% si muove in modo progressivo. Quindi il 35% di 800 sono 280 milioni di spermatozoi progressivamente motili per dose (800 x 35/100 o 0,35).
Troppo spesso non si ricevono le informazioni sulla concentrazione degli spermatozoi o sul numero di PMS nella dose, e talvolta la motilità dichiarata è la media di quella di svariati lotti di seme, non per quella data di raccolta in particolare. È quindi importante fare le giuste domande quando si compera del seme congelato, così si può capire se la dose che si sta per acquistare contiene una quantità accettabile di spermatozoi. Guardate il nostro blog Le domande che ciascun proprietario di fattrici dovrebbe fare prima di inseminare con seme congelato?
Ogni dose inseminante preparata da un Laboratorio Affiliato ad SBS è standardizzata ad 8 paillette da 0,5ml. Il seme è congelato ad una concentrazione di 200-250 milioni/ml, per un totale di 800 milioni – 1 miliardo di spermatozoi in una dose del volume finale di 4 ml. Considerato il nostro valore minimo di motilità post scongelamento del 30% raccomandato per la distribuzione commerciale, ciascuna dose inseminante quindi eccede addirittura il minimo raccomandato di 200 milioni di spermatozoi progressivamente motili per dose post scongelamento.
L’Analisi della Qualità del Seme può Variare tra Laboratori Diversi?
Si, questo è un fattore molto importante da tenere in considerazione. La motilità post scongelamento può variare in base al metodo di analisi, il tempo e la temperatura di incubazione ed il diluitore usato per la diluizione. Di conseguenza una analisi post scongelamento effettuata in un laboratorio può dare risultati completamente diversi da un anlisi effettuata da un altro laboratorio. Vedete la FAQ: La motilità post scongelamento può variare con il laboratorio che effettua l’analisi?
La concentrazione spermatica può essere determinata con molti metodi diversi di diversa accuratezza. Anche il momento nel quale la concentrazione spermatica è determinata può influenzare la vera concentrazione delle cellule nella dose inseminante. Alcuni laboratori possono effettuare la conta solo sul seme non diluito; questi considerano di recuperare il 70-80% degli spermatozoi dopo la centrifugazione e calcolano il volume finale del diluitore per il congelamento basandosi su questo dato “dedotto”. Se si è verificato un errore nella conta iniziale o dopo la centrifugazione la percentuale di recupero non è quella prevista, il numero di spermatozoi nella dose sarà compromesso. Un approccio più appropriato è quello di contare le cellule spermatiche dopo la centrifugazione così da sapere quale sia la vera percentuale di recupero; si può poi diluire le cellule con il diluitore per il congelamento fino alla concentrazione finale desiderata con maggiore accuratezza.
Ad SBS calcoliamo la concentrazione dopo la centrifugazione, sia con l’emocitometro o con il nucleocounter, e diluiamo poi gli spermatozoi a 200-250 milioni/ml nel diluitore per congelamento prima di riempire le paillettes. Effettuiamo una valutazione post scongelamento su 2 paillette di ogni eiaculato. Dopo lo scongelamento, il seme è testato per confermare l’assenza di crescita batterica e la motilità spermatica è valutata dopo che il seme scongelato è diluito in un mestruo diluitore ed incubato a 37° per 30 minuti.
Quali Paillette di che Dimensioni vengono usate per il Seme Congelato?
Le paillette sono il tipico sistema di magazzinaggio del seme congelato, è anche possibile benché poco frequente, ricevere del seme congelato in pellet e sacchetti. Oggigiorno la misura più comune delle paillette è 0,5ml, anche se si possono talvolta “incontrare” paillette da 0,25ml. In passato il seme veniva congelato in paillette da 4ml o 5ml, conosciute anche come makrotubes. Negli ultimi 10 anni, SBS ha optato per l’utilizzo delle paillette da 0,5ml perché si può ottenere una curva di raffreddamento più uniforme all’interno delle paillette, in quanto il loro diametro è considerevolmente minore rispetto a quello dei makrotubes. Quando la velocità di congelamento di tutti gli spermatozoi all’interno della paillette è uniforme, allora la qualità complessiva del seme è massimizzata una volta che essi vengono scongelati e sono pronti per l’inseminazione. Un altro beneficio che si ottiene usando le paillette da 0,5ml, è che possono essere usate con una macchina riempitrice semiautomatica che assicura un riempimento uniforme delle paillette, una sigillatura sicura ed un minor tempo per il processamento. Inoltre, le paillette da 0,5ml si possono immagazzinare in molti modi diversi sia in goblets piccoli o bicchieri più grandi. Oltretutto poi la valutazione post scongelamento di 1 o 2 paillette da 0,5ml da ciascun lotto rappresenta solo 1/8 o ¼ di una dose inseminante, laddove con i makrotubes una paillette costituisce una dose, quindi quando si effettua una valutazione post scongelamento su una paillette, si perde una dose inseminante.
È importante prestare particolare attenzione al volume della bolla d’aria all’interno della paillette, non deve essere eccessiva, perché più spazio è occupato dall’aria, meno sarà disponibile per il seme. Poiché una dose adeguata di seme è dettata dalla qualità degli spermatozoi, dalla concentrazione e dal volume, un volume insufficiente della dose può compromettere la vostra dose inseminante. Per questa ragione preferiamo paillette incolori o colorate trasparenti per permettere la visualizzazione del seme all’interno della paillette. Se le paillette galleggiano nell’azoto liquido è molto probabile che contengano grandi bolle d’aria e siano riempite solo parzialmente. Dovreste comunicare al proprietario o agente del seme se ricevete delle paillette che galleggiano nell’azoto liquido o hanno grosse bolle d’aria.
Quante Paillette costituiscono una Dose?
Il numero di paillette in una dose inseminante può essere molto variabile all’interno dell’industria equina; può andare da 1 a 10 o più paillette per dose. Nel caso dei makrotubes da 5ml una paillette può costituire una dose, ma questo può non sempre essere così. È importante che il vostro contratto di monta e/o le istruzioni per lo scongelamento specifichino esattamente quante paillette costituiscono una dose. Fate attenzione al fatto che il numero di paillette può non essere sempre lo stesso per un determinato stallone. Poiché l’industria raccomanda che il numero minimo sia di 200 milioni di spermatozoi progressivamente motili per dose, il proprietario o l’agente del seme spesso aggiustano il numero di paillette da 0,5ml in base alla motilità progressiva post scongelamento di quello specifico lotto di seme congelato. Quindi uno stallone può avere in commercio dosi da 2,3 o 4 paillette per dose.
Un altro fattore da considerare in merito al numero di paillette per dose è la concentrazione di cellule. Per uno stallone con una motilità progressiva post scongelamento del 30% congelato a 200 milioni di spermatozoi per ml, il numero di spermatozoi progressivamente motili (PMS) in una dose da 8 x 0,5ml è di 200 milioni.
Invece, se lo stallone viene congelato da un altro laboratorio, e questo lo congela a 400 milioni di spermatozoi per ml, ed ha la stessa motilità progressiva post scongelamento del 30%, allora solo 4 paillette x 0,5ml saranno necessarie per soddisfare il valore richiesto di 200 PMS/dose.
Un’altra prassi comune dei proprietari e/o agenti di seme congelato è quella di tagliare il numero di paillette per dose se sono stati ottenuti buoni risultati in termini di fertilità, ad esempio se uno stallone ha iniziato la sua prima stagione con seme congelato a 4 paillette/dose ed alla fine della stagione ha avuto una percentuale di gravidanza accettabile, l’anno successivo il proprietario/agente potrebbe ridurre il numero di paillette per dose a 3, se di nuovo si ottengono percentuali accettabili, ridurrà a 2 paillette l’anno successivo. Questo non significa che per tutti gli stalloni si possono dividere le dosi a metà ed ottenere risultati di fertilità accettabili, perché essi dipendono dal numero di spermatozoi progressivamente motili nella dose originaria ed anche dalla fertilità intrinseca di quel particolare stallone, guardate anche il blog article Ne basta solo uno…giusto?. Tratteremo l’argomento del taglio delle dosi sul nostro blog in futuro, nel frattempo potete trovare utili i commenti a questo articolo “The Pros and Cons of 1 or 2 Dose Insemination Protocols”.
Se il numero di paillette per dose per uno stallone non sono standardizzate e non avete ricevuto sufficienti informazioni sulla dose da non poterlo determinare da voi, non avete altro modo di sapere se avete ricevuto una dose accettabile o meno. Per risolvere questo problema abbiamo standardizzato tutte le dosi preparate dai laboratori affiliati ad SBS ad 8 paillette x 0,5ml, indipendentemente dalla motilità post scongelamento. In questo modo quando ricevete 8 paillette da un laboratorio affiliato ad SBS sapete di avere una dose piena. Il seme di SBS viene congelato ad una concentrazione di 200-250 milioni/ml, con un numero totale di spermatozoi di 800 milioni – 1 miliardo in una dose finale di 4 ml. Data la nostra soglia minima del 30% di motilità progressiva per un programma commerciale di distribuzione, ciascuna dose inseminante quindi eccede anche il valore minimo raccomandato di 200 milioni di spermatozoi progressivamente motili per dose dopo scongelamento.
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